Պոլիմերազային շղթայական ռեակցիա, կրճատ՝ որպեսՊՇՌԱնգլերենում մոլեկուլային կենսաբանության տեխնիկան է, որն օգտագործվում է ԴՆԹ-ի հատուկ բեկորները ուժեղացնելու համար:Այն կարող է դիտվել որպես մարմնից դուրս ԴՆԹ-ի հատուկ վերարտադրություն, որը կարող է մեծապես մեծացնել ԴՆԹ-ի շատ փոքր քանակությունը:Ամբողջ ընթացքումՊՇՌռեակցիայի գործընթացում կարևոր դեր է խաղում նյութերի մեկ դասը՝ ֆերմենտները:
1. Taq DNA
Վաղ օրերի փորձերումՊՇՌ, գիտնականներն օգտագործել են Escherichia coli ԴՆԹ պոլիմերազ I, Բայց այս ֆերմենտի հետ կապված խնդիր կա. այն պետք է ամեն անգամ ցիկլ կատարելիս նոր ֆերմենտ լիցքավորի, ինչը փոքր-ինչ բարդացնում է վիրահատության քայլերը և դժվար է ամբողջությամբ ավտոմատ կերպով ուժեղացնել:Այս խնդիրը լուծվեց այն բանից հետո, երբ 1988 թվականին գիտնականները պատահաբար մեկուսացրին Taq ԴՆԹ պոլիմերազը Thermus aquaticus-ից: Այդ ժամանակից ի վեր ԴՆԹ-ի ավտոմատ ուժեղացումը իրականություն դարձավ:Այս ֆերմենտի հայտնաբերումը նույնպես ստիպում էՊՇՌտեխնոլոգիան հարմար, գործնական և ունիվերսալ տեխնոլոգիա է:Ներկայումս Taq DNA պոլիմերազը ամենատարածված պոլիմերազն է ԴՆԹ փաթեթներում:
2. PfuDNA
Ինչպես նշվեց վերևում, Taq DNase-ն ունի մեծ սխալ, ուստի գիտնականները որոշակի չափով փոփոխել են Taq ԴՆԹ պոլիմերազը, որպեսզի խուսափեն անհամապատասխանության պատճառով ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացումից, ինչը հանգեցնում է թեստի ոչ ճշգրիտ արդյունքների:Սակայն Taq ԴՆԹ պոլիմերազի փոփոխությունը կարող է արգելակել ԴՆԹ պոլիմերազի ակտիվությունը սենյակային ջերմաստիճանում:PfuDNA պոլիմերազը կարող է լավ լրացնել Taq ԴՆԹ պոլիմերազի վերը նշված թերությունները, այնպես որ PCR ռեակցիան կարող է իրականացվել նորմալ, և թիրախային գենի ուժեղացման հաջողության մակարդակը կարող է արդյունավետորեն բարելավվել:
3. Հակադարձ տրանսկրիպտազ
Հակադարձ տրանսկրիպտազը հայտնաբերվել է 1970թ.-ին: Այս ֆերմենտը օգտագործում է ՌՆԹ-ն որպես ձևանմուշ, dNTP-ն որպես սուբստրատ, հետևում է հիմքերի զուգավորման սկզբունքին և սինթեզում է ԴՆԹ-ի մեկ շղթա, որը լրացնում է ՌՆԹ-ի կաղապարը 5'-3' ուղղությամբ:Հակադարձ տրանսկրիպտազը հիմնականում կախված է ԴՆԹ-ի կամ ՌՆԹ-ի ձևանմուշների ԴՆԹ պոլիմերազային ակտիվությունից և, հետևաբար, չունի 3'-5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն:Այնուամենայնիվ, այն ունի RNase H ակտիվություն, որը որոշակի չափով սահմանափակում է հակադարձ տրանսկրիպտազի սինթեզի երկարությունը:Վայրի հակադարձ տրանսկրիպտազի ցածր հավատարմության և ջերմակայունության պատճառով գիտնականները նաև փոփոխել են այն։
ՀամարՊՇՌփորձերի, հիմնական ծախսվող նյութերն են՝ անհատական PCR խողովակ, 4/8-շերտ PCR խողովակ, PCR թիթեղներ:
ԼաբիոյիPCR ծախսվող նյութերունեն հետևյալըառավելություններ:
PCR թիթեղներ: Լայն ջերմային ցիկլերի համատեղելիություն;Բարձր հակադրություն, լավ նույնականացում;լավ լյումինեսցենտային արտացոլում;լավջերմահաղորդում;Հավաստագրված DNase, RNase, DNA, PCR ինհիբիտորներ և փորձարկված պիրոգենից զերծ:
Անհատական PCR խողովակներ: Գոլորշիակայուն; լավջերմահաղորդում;գերազանց օպտիկական հստակություն; Հավաստագրված DNase, RNase, ԴՆԹ, PCR ինհիբիտորներ և փորձարկված պիրոգենից զերծ:
4/8-շերտավոր PCR խողովակներ: Գերբարակ պատեր; բարձր հստակություն; լավ լյումինեսցենտային արտացոլում;կարող է օգտագործվել դեղագործական արդյունաբերության, սննդի արդյունաբերության և մոլեկուլային կենսաբանության մեջ; բարձրորակ, կուսական PP նյութ; Հավաստագրված DNase, RNase, ԴՆԹ, PCR ինհիբիտորներ և փորձարկված պիրոգենից զերծ:
Հրապարակման ժամանակը՝ հունիս-09-2023